小鼠畸胎瘤細(xì)胞(P19)
細(xì)胞介紹
加拿大渥太華大學(xué)的Me Burney等在1982年從雄性小鼠畸胎瘤中分離得到的，是一種能夠在體外培養(yǎng)的多能干細(xì)胞,P19細(xì)胞團(tuán)經(jīng)RA誘導(dǎo)可分化成神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞和纖維母細(xì)胞；而經(jīng)二甲基亞砜(DM SO)誘導(dǎo)則分化成心肌、骨骼肌和平滑肌細(xì)胞;在P19細(xì)胞向神經(jīng)元分化的過程中，神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)模式 基本模擬了正常小鼠神經(jīng)發(fā)育過程，因此,P19目前被用作一個(gè)研究神經(jīng)發(fā)育的 體外模型。P19細(xì)胞作為研究神經(jīng)分化機(jī)制的模型，顯著區(qū)別于其他細(xì)胞系的四 大特點(diǎn)是：①它具有正常小鼠的二倍體核型，細(xì)胞分裂快，可在體外迅速大量擴(kuò) 增，多次傳代也不喪失其分化能力。②P19細(xì)胞具有多種分化潛力，不同誘導(dǎo)條 件下可定向分化成不同類型的細(xì)胞，種植到孕鼠囊胚中能分化成多種類型細(xì)胞。 ③根據(jù)P19細(xì)胞誘導(dǎo)分化分階段進(jìn)行的特點(diǎn)，能將神經(jīng)分化的早期機(jī)制與參與 突起延伸的機(jī)制分開研究。④該細(xì)胞易于轉(zhuǎn)染，且轉(zhuǎn)染后仍能正常分化，適于進(jìn) 行細(xì)胞基因研究。通過轉(zhuǎn)染正?；蛲蛔兊哪康幕颍鰪?qiáng)或抑制它們的表達(dá)水平 可用于研究這些基因在神經(jīng)分化中的作用。另外，利用反義RNA阻斷內(nèi)源蛋白 的表達(dá)，可用來(lái)觀察這些蛋白在神經(jīng)分化中的作用。
(references:
1.張金平等.全反式維甲酸體外誘導(dǎo)P19細(xì)胞向心肌方向分化.[」]中國(guó)組織化學(xué)與 細(xì)胞化學(xué)雜志.2012.1
2.梅宇欽等.建立經(jīng)優(yōu)化的促P19鼠胚胎癌細(xì)胞神經(jīng)分化模型.浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī) 學(xué)版）2012.04)
 
細(xì)胞特性
1)來(lái)源：胚胎；崎胎癌
2)形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
3)含量：>lxl06個(gè)/mL
4)污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5)規(guī)格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1)干冰運(yùn)輸，收到后 立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；（2)存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì) 胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。
細(xì)胞用途：僅供使用。
 
小鼠畸胎瘤細(xì)胞(P19)細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1.準(zhǔn)備MEMa培養(yǎng)基(MEMa+培養(yǎng)基(GIBCO,添加NaHC〇31.5g八，肌醇43.2mg八，葉酸8.82mg八,0-巰基乙醇7.8mg八)，90%; BCS，7.5%;胎牛血清，2.5%。
2. 培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理：
復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢 查細(xì)胞密度。
細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
 
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2■加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37C培
養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
 
細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走)，加 入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍 存。
 
小鼠畸胎瘤細(xì)胞(P19)注意事項(xiàng)：
收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們電聯(lián)。
所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。